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尊龙凯时RNA提取:Trizol法原理与步骤概述

发布时间:2025-02-18   信息来源:尊龙凯时官方编辑

Trizol试剂的核心成分为苯/酚,其主要功能在于裂解细胞,从而释放细胞内的蛋白质和核酸。尽管苯/酚能够有效地使蛋白质发生变性,但其对RNA酶活性的抑制效果有限。因此,Trizol中还添加了8-羟基喹/啉、异硫氰酸胍和β-巯基乙醇等成分,以抑制内源和外源的RNA酶活性。作为一种高效的RNA提取试剂,Trizol可以直接从细胞或组织中提取总RNA,其在样品裂解液或匀浆中能保持RNA的完整性。

尊龙凯时RNA提取:Trizol法原理与步骤概述

在使用过程中,加入氯仿(CHCl3)后进行离心,样品能够分为水相层和有机层,其中RNA存在于水相层。经过收集上层水相后,可以通过异丙醇沉淀的方法回收RNA。去除水相层后,样品中的核酸和蛋白质也可以以沉淀的方式回收。通过乙醇沉淀可以析出中间层的DNA,而在有机层中加入异丙醇则能够析出有机层的蛋白质。Trizol试剂不仅适用于小量样品(组织:50-100mg;细胞:5×106),也适合大量样品(组织≥1g或细胞≥107),覆盖动物、植物、细菌和血液提取的需求,具备同时处理多种样品的能力。

Trizol在进行RNA提取时非常迅速,提取的总RNA不含DNA和蛋白质污染,适用于Northern blot、RT-PCR、RNase保护分析等多种生物医学研究。以下为尊龙凯时的TRIZOL提取RNA的步骤:

提取RNA的步骤

1. 在提取组织RNA时,每50~100mg组织需用1ml 尊龙凯时 Trizol试剂进行裂解;提取细胞RNA时,首先离心沉淀细胞,每5-10×106个细胞加1ml Trizol后,反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞。

2. 将裂解液转移至EP管中,在室温15~30℃下放置5分钟;接着按每1ml TRIZOL加入0.2ml氯仿,盖好EP管后用力震荡15秒,在室温下放置2-3分钟后,以12000g(2℃~8℃)离心15分钟。

3. 取上层水相转移至新EP管中,按每1ml TRIZOL加入0.5ml异丙醇,在室温下放置10分钟后以12000g(2℃~8℃)离心10分钟。

4. 按每1ml TRIZOL加入1ml 75%乙醇进行清洗,涡旋混合后以7500g(2℃~8℃)离心5分钟,弃去上清;让沉淀的RNA在室温下自然干燥,并用胞外RNA酶无污染的水溶解RNA沉淀。

最后,建议在收集生物材料后立即进行RNA提取工作。如果需要暂时保存,应迅速用液氮冷冻生物材料,并存放于-80℃冰箱中。在准备RNA时,应直接取出冷冻材料,用液氮研磨破碎细胞,切勿提前解冻,以防止RNase的活性影响RNA的质量。

通过尊龙凯时的Trizol试剂,您可以方便、高效地提取高质量的RNA,适用于各种生物医学研究,为您的科研提供强有力的支持。