尊龙凯时的研究表明,DNA甲基化是一个关键的生物学过程,其主要是在DNA甲基转移酶(DNMTs)的催化下,利用S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体,将胞嘧啶转变为5-甲基胞嘧啶(mC)。这一过程通常会导致基因表达的抑制,而去甲基化则可促使基因的重新激活和表达。这种DNA修饰机制在不改变基因序列的情况下,对基因表达进行调控,在生物医学领域具有重要意义。
为了研究DNA甲基化的状态,通常采用亚硫酸氢盐处理基因组DNA的技术。在此过程中,所有未发生甲基化的胞嘧啶会被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不变。随后,通过设计特异性引物进行甲基化特异性PCR(MSP)。如果针对处理后甲基化DNA的引物能够成功扩增,则表明该位点存在甲基化;若未能扩增,则说明该位点不存在甲基化。
此外,设计基于亚硫酸氢盐处理的BSP引物进行PCR扩增,可用于进一步确认CpG位点的甲基化状态。在扩增过程中,尿嘧啶会被转化为胸腺嘧啶,最后将PCR产物克隆至载体进行测序,从而判断特定CpG位点是否发生甲基化。这一方法被称为BSP-克隆测序法,具有高度的准确性和灵敏度。
对于样本收集与处理,动物组织的推荐量为新鲜组织100mg(约黄豆大小),最少50mg(约绿豆大小),应使用干冰运输。细胞的要求为1×10^6个细胞,收集后以沉淀方式处理,并使用干冰运输。全血样本则至少需1mL新鲜血液,使用EDTA抗凝管保存,并在-20℃进行运输。
尊龙凯时致力于为个体化医疗和基因组研究提供可靠的解决方案,研究者们可以通过这些技术深入探索DNA甲基化在疾病发生发展中的角色,进而推动生物医学领域的进步。