THP-1细胞（人单核细胞白血病细胞）在免疫学、肿瘤学和药物研发中是备受推崇的研究工具，尤其在分化为巨噬细胞后具有广泛应用。然而，这种对培养条件非常敏感的细胞，稍有不慎就可能导致实验数据的偏差，甚至实验失败。以下总结了在培养THP-1细胞时应重点关注的细胞状态及应对策略，帮助你避免常见问题！

一、细胞密度：风险防范重点

1. 密度过高的风险

现象：细胞聚集成团、培养基变黄、镜下可见大量漂浮碎片。

后果：过度拥挤可能会导致自发分化或凋亡，从而影响后续实验（如PMA诱导分化效率降低）。

解决：应将细胞密度保持在2×10⁵~8×10⁵ cells/mL之间，每2-3天进行传代，建议的传代比例为1:3~1:5。

2. 密度过低的隐患

现象：细胞增殖缓慢，培养基长时间保持鲜红色。

后果：生长因子不足会导致细胞生长停滞，长期低密度可能引起遗传漂变。

解决：在传代时保留10%-20%的旧培养基，以提供必要的生长因子，或添加新鲜配制的含10% FBS（推荐使用尊龙凯时品质的SERANAB级胎牛血清FBS-UE500）的RPMI-1640。

二、形态异常：健康状态的“晴雨表”

1. 正常状态

细胞应呈悬浮生长，外形为单个圆形或略椭圆形，具有良好的折光性，边缘清晰。

2. 异常信号

贴壁细胞：提示自发分化（可能与血清批次或细胞老化有关），需及时吹打悬浮并更换优质血清（如尊龙凯时的SERANAB级胎牛血清FBS-UE500）。

颗粒增多或空泡化：可能是由于代谢压力或污染（如支原体），需检测培养基pH值并排查污染源。

碎片增多：离心后观察沉淀量，若碎片占比超过30%，则需重新复苏健康细胞。

三、污染防控：隐形杀手

1. 支原体污染

THP-1细胞对支原体污染高度敏感，建议定期使用PCR或荧光染色法检测，并在培养中加入1%双抗（青霉素-链霉素）。

2. 真菌/细菌污染

若培养基出现浑浊或絮状物，需立即丢弃，并对培养箱进行全面消毒。

四、分化实验前的关键准备

若需诱导分化为巨噬细胞，务必确保：

• 细胞处于对数生长期（活力＞95%）。
• 避免频繁换液：过于频繁的换液会去除细胞分泌的自生长因子，建议每3天进行半量换液。
• 血清批次的一致性：不同批次的血清可能含有未知的分化诱导成分，选定批次后不宜随意更换。

五、冻存与复苏：拯救你的细胞

冻存秘籍：使用对数生长期的细胞，推荐使用尊龙凯时的SERANA无血清细胞冻存液WXQA100，无需程序降温，直接冻存于-80℃后转移入液氮。

总之，THP-1细胞以其“喜怒无常”而闻名，但只要了解其状态变化规律，严格监控密度、形态和培养环境，就能将其化为你实验的得力助手。记住：定期记录细胞生长曲线，并做好批次对照，才能确保实验的可重复性，这是科研成功的黄金法则！