尊龙凯时为您提供人B细胞淋巴瘤OCILy19的细胞培养指南，确保您的实验顺利进行。以下为详细的细胞培养条件与操作步骤。

一、细胞培养条件

细胞名称：人B细胞淋巴瘤OCILy19
生长特性：悬浮生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S
传代方法：首次建议1:2进行传代
备注：用无菌离心管收集培养基用于对比培养，如果效果不理想，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

接收细胞后，将其培养至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口是最佳的方法。在操作前，使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，随后放入超净工作台进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行处理。观察细胞生长情况，拍摄并保存不同倍数的细胞图像（最佳为40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片为后续售后服务的重要依据，未提供照片将视为收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

1. 如果细胞未达到80%汇合度，将完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基并放入37℃、5% CO2孵箱中培养。
2. 当细胞密度超过80%时，进行以下步骤：
    1) 弃去培养上清，用不含钙镁的PBS清洗细胞1-2次。
    2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml于培养瓶中，在37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞状态，若大部分细胞变圆并脱落，迅速回到操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基以终止消化。
    3) 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清后补加1-2ml完全培养基重悬。
    4) 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），加入新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，使用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，倒置显微镜下观察，待细胞回缩并变圆后加入5ml完全培养基终止消化，再轻轻吹打使细胞脱落，将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐，请在-80℃冰箱中存放超过24小时后再转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清后，使用5ml完全培养基重悬细胞，并接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

部分细胞贴壁不牢，在运输过程中可能会发生细胞脱落，这是正常现象。若脱离较多，可将培养瓶中所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5分钟，收集上清作过渡培养（后续对比培养），沉淀中添加1-2ml胰蛋白酶，轻吹重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再次离心，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬，按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），再添加新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1. 在细胞出现问题的情况下，可能重发的情形包括：
    1) 细胞在运输过程中遭遇损坏或丢失；
    2) 如48小时内收到的细胞存在污染，请提供真实实验结果以便核实；
    3) 常温运输的细胞若静置24小时后存活率低，需提供细胞状态照片；
    4) 干冰运输的细胞如在规定时间内出现污染，依据具体情况重发；
    5) 如需确认细胞活性，请在7天内提供染色结果；
    6) 收到细胞后的2-3天内需拍照，若3天后未告知视为合格。
    对于4-7天内出现问题的情况，需提供收到细胞前三天的照片和详细操作步骤，相关责任由技术人员判断。

2. 细胞出现问题的情况下，不予重发的情形包括：
    1) 客户自身造成的细胞污染；
    2) 不当操作导致的细胞状态恶化；
    3) 非本库推荐的培养体系导致的细胞状态不良；
    4) 未提供细胞前三天照片的情况；
    5) 存在非本公司合理指导以外的处理；
    6) 接收细胞后两天内未告知问题；
    7) 其它具体情况由两方协商处理。

使用尊龙凯时的细胞培养系统，可以为您的研究提供可靠保障，期待您的成功实验！