尊龙凯时细胞培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称及生长特性：该细胞需在贴壁生长的条件下培养。冻存时使用无血清冻存液，培养体系为1640培养基加10%胎牛血清（FBS）、1%青霉素-链霉素（P/S）、1%丙酮酸钠以及1%L-谷氨酰胺。建议传代比例为1:2，首次传代后每两天更换培养基。备注：请使用无菌离心管收集上层培养基，为后续对比培养留存样本。如对比培养效果不佳，强烈建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理步骤

在细胞适应良好的条件下，灌满完全培养液并密封瓶口是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，喷洒75%酒精对细胞瓶进行消毒，然后在超净工作台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放置于37℃、5%CO2培养箱中静置3-4小时以稳定状态后再进行后续操作。观察细胞生长状态，并进行不同倍数拍照保存（最佳选择40x、100x、200x各一张），前三天的照片是重要的维权依据，如未提供照片则默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

1. 若细胞汇合度未超过80%，收集培养液至离心管中，保留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2培养箱中培养； 2. 若细胞密度超80%，可进行传代，具体步骤如下：   1) 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次；   2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟。显微镜下观察细胞如大多数变圆并脱落，迅速轻轻敲击培养瓶后加入5ml以上完全培养基以终止消化；   3) 向细胞悬液中吹打使细胞完全脱落后，转移至离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬；   4) 将细胞悬液按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞一次； 2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，翻转观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻打细胞使其脱落，然后转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟； 3. 去除上清，加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管； 4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐，则需在-80℃冰箱存放24小时以上后再转入。

四、细胞复苏

从液氮中取出冻存管时，请佩戴防护面具，迅速置于37℃水浴解冻，直至无结晶后再用75%酒精擦拭外壁。将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；弃去上清后，用5ml完全培养基重悬并接种至T25培养瓶中，放入37℃、5%CO2细胞培养箱中继续培养；第二天，使用新鲜完全培养基继续培养。

五、售后条款

1. 细胞出现问题的可重发情况及判定标准：   1) 运输途中细胞丢失、瓶身破损、培养液泄漏等，均可重发；   2) 收到48小时内如发现细胞污染，请提供真实实验结果以便核实后重发；   3) 常温发货细胞静置24小时及干冰发货后复苏后24小时未存活的，需提供照片可重发；   4) 干冰发货细胞复苏24小时后或常温发货细胞静置未开封出现污染可重发；   5) 细胞活性问题，请在收到7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝法鉴定细胞活力，核实后重发；   6) 收到细胞当天及第2、3天拍照，3天未反映则视为合格。若4-7天内出现问题需提供前三天照片及操作步骤，技术人员判定责任后可重发。 2. 细胞出现问题不予重发情况：   1) 客户造成细胞污染不重发；   2) 不当操作导致细胞状态不良不重发；   3) 非推荐培养体系导致细胞状态不佳不重发；   4) 细胞状态未提供前三天照片的，不重发；   5) 对细胞进行其他处理的不重发；   6) 收到后2天内未告知的问题将不重发；   7) 具体情况视情况而定。