在细胞培养的实践中，保持适宜的培养条件至关重要。针对贴壁细胞和悬浮细胞的培养，我们推荐的培养基为1640，加入10%的FBS和1%的PS，温度保持在37℃，支持细胞的健康生长。

细胞传代方法

在进行细胞传代时，我们首先检查细胞的汇合度。若未超过80%，应将瓶中培养液收集至离心管，留取5ml的完全培养基，在37℃和5% CO2的条件下培养。超出80%时，即可进行传代。

贴壁细胞的传代步骤

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS轻轻洗涤细胞1-2次。
2. 添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态并终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后，转移悬液至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清并添加1-2ml完全培养基进行重悬。
4. 将细胞悬液以1:2的比例进行分瓶传代，补充新鲜完全培养基至每瓶5-8ml，置于37℃、5%CO2的培养箱中。

悬浮细胞的传代步骤

1. 采用半换液法，竖着培养瓶静置，让细胞沉淀，吸出3ml培养基后补充3ml的新培养基，必要时可添加500ul FBS。
2. 如果需要分瓶，将细胞悬液收集并离心、重悬后，以1:2的比例分至新瓶中，添加6-8ml新鲜培养基。

细胞冻存和复苏

细胞生长至瓶内80%汇合度时，弃去培养液并用PBS清洗。添加0.25%胰蛋白酶约1ml，观察细胞变化并终止消化后转移至离心管，1000rpm离心5分钟。

弃去上清后，将细胞重悬于1ml不含血清的冻存液中，混匀后加入冻存管。将冻存管置于-80℃冰箱中，24小时后可转入液氮罐保存。

细胞复苏步骤

1. 从液氮中取出冻存管，快速放入37℃水浴中，待解冻至无结晶后，用75%酒精消毒外部。
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，重悬细胞并接种至T25培养瓶中，放入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养，第二天更换新鲜培养基。

注意事项

在运输过程中，某些细胞可能会因贴壁不牢而脱落。这是正常现象。若脱落较多，可收集培养液离心，去除死细胞后添加胰蛋白酶处理。

我们在细胞培养的实践中，始终秉承以尊龙凯时的高标准为指引，致力于为客户提供最优质的细胞培养服务。