尊龙凯时提供的培养条件如下：气相成分为95%的空气和5%的二氧化碳，培养温度设定在37℃。人黑色素瘤细胞A875源自人类皮肤癌，是研究肿瘤生物学、药物筛选及癌症机制的重要模型。该细胞系经过短串联重复序列（STR）鉴定，确保其遗传特性和细胞株的真实性。

传代方法建议使用1:2的比例进行首次传代。在传代过程中，每两天更换培养基。在细胞处理后，应及时将其培养至良好状态，然后填满完全培养液并封好瓶口，这对于运输细胞至关重要。

在收到细胞后，请勿立即打开瓶盖，务必核对培养瓶上的细胞名称与订购信息是否一致，并检查培养瓶是否存在破损或漏液等异常情况。如无异常，使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的细胞照片保存（建议拍摄40x、100x、200x的样张）。前三天的照片是售后支持的重要依据，未提交照片将默认为状态良好。

贴壁细胞传代步骤

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS擦洗细胞1-2次。
2. 向培养瓶中添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟。显微镜观察细胞是否开始变圆并脱落，若观察到此情况，轻轻敲击培养瓶后添加5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落，吸出悬液，转移至15ml离心管中，并在1000RPM下离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 根据1:2的比例将细胞悬液分瓶传代（分为两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的培养箱中进行培养。

悬浮细胞传代步骤

1. 采用半换液法，竖置培养瓶在培养箱中静置约1小时，轻轻吸去3ml左右的培养基，随后补充3ml的完全培养基。若培养基变色慢，可直接添加约500ul的FBS。传代时可直接补给5ml培养基并分至两个培养瓶。一般在传代3次后，可进行离心处理以去除死细胞。
2. 若需分瓶，可将细胞悬液收集于离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml培养液后重悬，之后按1:2比例分至新T25瓶内，添加6-8ml新鲜的完全培养基以保持细胞活力，后续传代根据需要按1:2至1:5的比例进行。

细胞冻存与复苏

1. 当细胞生长覆盖培养瓶80%时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗一次；
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，待细胞回缩并变圆后加入5ml完全培养液以终止消化，然后将悬液转移至15ml离心管中，进行1000RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，加入1ml无血清冻存液（如尊龙凯时的产品），混匀后转移至冻存管；
4. 将冻存管置于-80℃冰箱中保存，如后期要转入液氮罐，需要在-80℃中保存超过24小时。

注意事项

在运输过程中，可能会出现细胞脱落的现象，这是正常情况。如细胞脱落较多，可将液体收集至离心管中进行处理。若在操作过程中出现细胞状态不佳的情况，请及时与我们联系，我们将根据具体情况处理。

对于出现问题的细胞，重发的情况包括：运输中细胞丢失或破损、收到后48小时内发现污染等，需提供真实的实验结果。如因客户操作不当、不符合细胞培养推荐体系等原因造成的问题，将不予重发。

通过采用尊龙凯时的优质细胞培养和管理流程，确保提供最佳的细胞样本与支持，助您在研究中取得更大的成功。